牡蛎中戊型肝炎病毒检测方法的比较

作者：王秋媛; 张瑞婷; 尹文娇^*; 曹经瑗; 李晓梅^*; 毕胜利

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2023, 37(06).

• 牡蛎
• 戊型肝炎病毒
• 前处理方法
• 核酸提取
• Real time RT-PCR

目的对牡蛎中戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)检测方法进行比较, 为牡蛎中HEV的检测提供技术参考。方法参考欧盟ISO/TS 15216-2∶2019, 用蛋白酶K消化法对人工污染HEV粪便悬液的牡蛎消化腺标本进行前处理后, 分别用四种核酸提取方法进行HEV RNA提取, 通过Real time RT-PCR检测, 比较HEV回收率;分别用蛋白酶K消化法、蛋白酶K消化+PEG沉淀法和蛋白酶K消化+PEG沉淀+氯仿抽提法对人工污染的牡蛎消化腺标本进行前处理, 用最优核酸提取方法进行HEV RNA提取, 通过Real time RT-PCR检测, 比较三种前处理方法的HEV回收率和抑制率。将最优HEV检测方法应用于市售牡蛎标本检测。结果四种核酸提取方法的HEV回收率分别为1.37%, 2.50%, 4.24%和7.56%, 差异有统计学意义(F=847.220, P<0.001);三种前处理方法的HEV回收率分别为6.02%, 13.65%和21.17%, 差异有统计学意义(F=16.800, P<0.001), 蛋白酶K消化+PEG沉淀+氯仿抽提法回收率最高;三种方法的抑制率分别为13.38%, 20.98%和8.66%, 差异具有统计学意义(F=20.205, P<0.001), 蛋白酶K消化+PEG沉淀+氯仿抽提法抑制率最低。在120份市售牡蛎标本中检出一份HEV RNA阳性标本。结论在对牡蛎标本进行HEV检测时, 用蛋白酶K消化+PEG沉淀+氯仿抽提法进行前处理, 能够提高牡蛎中HEV的回收率, 更适用于牡蛎标本的前处理;不同厂家的病毒核酸提取方法的HEV回收率不同, 开展检测前应比对筛选, 择优使用。

• 单位
  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 山东第一医科大学; 山东省医学科学院