突变的SOD1 cDNA与人MAP/MARK1片段在人胚肾293细胞中的相互作用

作者：陈桂生; 史树贵; 李露斯; 陈康宁; 袁顺宗; 彭旭; 吴军; 罗高兴

来源：第三军医大学学报, 2007, (24): 2327-2329.

• 突变SOD1cDNA
• 人MAP/MARK1
• 免疫共沉淀
• 相互作用

目的用酵母双杂交方法显示突变的SOD1cDNA与人MAP/MARK1的片段结合,进一步探讨二者能否在哺乳动物表达系统人胚肾293细胞中发生相互作用,以验证酵母双杂交的结果。方法采用PCR方法及双酶切的方法构建含突变SOD1cDNA片段的真核表达质粒pCMV-Myc和含人MAP/MARK1的片段真核表达质粒pCMV-HA,分别或共同转染人胚肾293细胞,进行免疫共沉淀检测。结果免疫共沉淀结果表明,重组含突变的SOD1cDNA质粒pCMV-Myc分别与空载体pCMV-Myc、pCMV-HA共转染,免疫沉淀物中均未检测到结合蛋白,只有重组含突变SOD1cDNA真核表达质粒pCMV-Myc与重组含人MAP/MARK1的片段真核表达质粒pCMV-HA共转染时,在免疫沉淀物中能检测到结合蛋白,表现在蛋白免疫印迹上有特异性目的条带。结论突变的SOD1cDNA与人MAP/MARK1片段在人胚肾293细胞中存在蛋白水平的相互作用。

• 单位
  第三军医大学西南医院; 神经内科