Flag-p107真核表达载体的构建及其在ECA109细胞表达及鉴定

作者：来雯婷; 崔元龙; 刘伊宁; 李晓苗; 吉别克·瓦提别克; 美丽**提·达吾列提汗; 沙亚哈提·别尔克哈之; 王海峰; 李颖; 李惠武; 李卉

来源：贵州医药, 2017, 41(02): 121-225.

• 视网膜母细胞瘤样蛋白I
• 真核表达载体
• 分子克隆
• 基因表达

目的构建N端含flag标签的p107的真核表达载体,及其在EC109细胞表达的鉴定。方法设计引物在p107蛋白N端增加flag标签,通过PCR扩增获得3×flag-p107cDNA片段,将此片段插入真核表达质粒CMV-MCS-SV40-Neomycin中;再与质粒CMV-MCS-SV40-Neomycin连接,将所得的融合基因进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用电转染将其转染至ECA109细胞中;利用Western-Blotting检测融合蛋白CMV-MCS-3flag-p107-SV40-Neomycin的表达情况。结果重组真核表达载体构建正确,该重组质粒能在ECA109细胞中表达。结论成功构建真核表达载体CMV-MCS-3flag-p107-SV40-Neomycin并建立了其在ECA109细胞的表达。

• 单位
  基础医学院; 新疆医科大学附属肿瘤医院; 中心实验室; 新疆医科大学