siRNA沉默Cdkl5对原代皮质神经元Mecp2及其下游靶基因表达的影响

作者：杨文旭; 潘虹

来源：基础医学与临床, 2015, 35(07): 884-888.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2015.07.005

• Rett综合征
• Cdkl5
• Mecp2
• Bdnf

目的探讨CDKL5在Rett综合征中与Me CP2相互作用的机制。方法体外培养孕18 d SD胎鼠皮质神经元,通过小RNA干扰技术(siRNA)敲低Cdkl5,分为干扰组(Cdkl5 shRNA)和对照组(control shRNA)。用Real time-PCR及Western blot法评估Cdkl5在mRNA和蛋白水平被敲低的效率;Cdkl5表达降低后Mecp2和Mecp2相关的下游靶基因表达变化。对Cdkl5 shRNA转染后神经元用CCK8法检测吸光度值评估神经元活力;用real time-PCR和Western blot法检测凋亡基因caspase3和凋亡活性蛋白cleaved-caspase3评估神经元凋亡状态。结果干扰组与对照组比较,Cdkl5在mRNA水平下降73%,在蛋白水平下降75%(P<0.05);Mecp2在mRNA和蛋白水平升高约2倍(P<0.05);BdnfⅪ在mRNA水平明显下降,Psd95在mRNA水平明显上升(P<0.05)。结论建立稳定的Cdkl5基因敲低的原代皮质神经元模型,并初步提示CDKL5可能通过对Me CP2的调控诱导了下游靶基因的变化。

• 单位
  北京大学第一医院