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摘要
目的观察蜂毒肽(Melittin)对IL-1β诱导的大鼠终板软骨细胞(endplate chondrocytes,EPCs)Ⅱ型胶原表达的影响。方法取4周龄SD大鼠进行腰椎EPCs培养,并行形态学观察、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定。取第3代EPCs,采用MTT法确定IL-1β及Melittin对细胞干预的最适浓度。然后将第3代EPCs随机分为4组:A组为正常组,不加任何药物;B组加入最适浓度的IL-1β;C组加入最适浓度的Melittin;D组加入最适浓度的IL-1β及Melittin;干预48 h后采用Western blot法检测Ⅱ型胶原表达。结果倒置显微镜观察示,第1代细胞多呈多角形,第5代后细胞增殖能力逐渐减弱,细胞形态向梭形转变。细胞质中的酸性黏液物质(如蛋白多糖)被甲苯胺蓝染成深蓝色。免疫荧光染色标记Ⅱ型胶原后,可见细胞骨架部分呈阳性表达(呈绿色荧光)。MTT法检测示,在干预24、48 h后,IL-1β及Melittin对EPCs均有抑制作用,并呈剂量依赖性,最终确定IL-1β及Melittin干预的最适浓度分别为10 ng/mL和1.0μg/mL。Western blot法检测示,与A组比较,B组IL-1β干预后Ⅱ型胶原表达明显减少,C组Melittin干预后Ⅱ型胶原表达明显增加,但D组与A组比较无明显差异。A、B、C、D组Ⅱ型胶原相对表达量分别为0.991±0.024、0.474±0.127、1.913±0.350、1.159±0.297,除A、D组间比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论研究表明Melittin具有保护终板软骨作用,为其用于防治脊柱退变性疾病提供了相关实验依据。
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