一种gRNA快速合成及检测方法的建立

作者：杜建勇; 邓然; 高虹; 雍伟东

来源：中国实验动物学报, 2015, 23(03): 267-290.

• CRISPR/Cas9
• PCR扩增
• 体外转录
• 体外检测

目的建立一种gRNA快速合成及检测的方法。方法设计引物并利用PCR技术迅速扩增gRNA的DNA模板片段,然后通过体外转录纯化得到gRNA;最后通过体外反应迅速对gRNA和Cas9酶切效率及特异性进行检测。结果体外合成的gRNA特异性强,活性高,在靶点上成功切开DNA双链。结论成功建立gRNA快速合成及检测的方法,为后续转染或显微注射筛选有活性gRNA节约了时间。

• 单位
  北京协和医学院; 国家中医药管理局; 中国医学科学院医学实验动物研究所