应用高分辨率熔解曲线分析快速筛查和诊断citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症

作者：温鹏强; 王国兵; 陈占玲; 崔冬; 刘晓红; 尹利芳; 宋萍; 袁泉; 陈淑丽; 廖建湘

来源：中华医学遗传学杂志, 2012, 29(02): 167-171.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2012.02.011

• 高分辨率熔解曲线
• citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症
• SLC25A13基因
• 遗传代谢病
• 突变

目的探讨高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术用于citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency,NICCD)筛查和诊断的可行性。方法根据中国人群SLC25A13基因的热点突变类型(851del4、1638ins23、IVS6+5G>A和IVS16ins3kb)设计特异性HRM扩增引物,挑选经测序证实的50名正常对照和20例NICCD患儿,建立和完善HRM检测条件。用优化后的HRM检测方法对171例临床疑似的NICCD患者进行HRM筛查。若受检样本的熔解曲线与阳性质控样品相吻合,则进行DNA测序分析。结果优化后的HRM方法能准确地对50名正常对照及20例NICCD患儿进行基因分型,其灵敏度和特异性均为100%(70/70)。重复实验表明,相同基因型的不同样品HRM熔解曲线完全吻合,重复性好。在171例疑似患儿中,有7例患儿熔解曲线与阳性质控样品基因型相符,其HRM基因分型为:1例851del4纯合突变,1例IVS6+5G>A杂合突变,3例851del4杂合突变,1例[IVS6+5G>A]+[851del4],1例[1638ins23+IVS16ins3kb]+[1638ins23]。DNA测序证实了HRM基因分型,准确率为100%。结论 HRM技术具有高通量、操作简便、结果准确、重复性好等优点,可对临床疑似的NICCD患儿进行基因筛查和诊断。

• 单位
  东莞市人民医院; 深圳市儿童医院