Notch1胞内段荧光表达质粒的构建及鉴定

作者：李明华; 张芳婷; 高书颖; 于洁

来源：现代肿瘤医学, 2014, 22(04): 759-761.

DOI：10.3969/j.issn.1672-4992.2014.04.08

• Notch信号通道
• 鼻咽癌
• 质粒构建

目的:构建能够在鼻咽癌细胞株中高效表达人Notch1信号胞内段(NIC)的荧光质粒。方法:通过RT-PCR获得人NIC的cDNA;利用基因重组技术插入到pEGFP-N1中;在脂质体介导下转染人低分化鼻咽癌细胞CNE2后,经荧光显微镜、RT-PCR和Western blot检测NIC的表达情况。结果:RT-PCR方法得到一条2424bp的特异性扩增产物,酶切和基因测序结果表明重组质粒构建成功。转染48h后,检测到绿色荧光表达,RT-PCR和Western blot的结果显示NIC的表达量升高。结论:正确构建了人NIC荧光表达质粒。该质粒能够在鼻咽癌细胞株中高效表达,为研究Notch信号通路在鼻咽癌中的作用奠定了实验基础。

• 单位
  中心实验室; 北京大学深圳医院