大鼠PAX2真核表达质粒构建及瞬时转染肾小管上皮细胞模型建立

作者：李里; 吴玉斌; 宫亮

来源：山东医药, 2012, (35): 35-38.

• 核转录因子
• 真核表达质粒
• 肾小管上皮细胞

目的为进一步研究核转录因子(PAX2)对肾小管上皮细胞的转分化调控机制提供依据。方法真核表达质粒(PGC-FU)-PAX2真核表达质粒的构建:设计PAX2的引物,PCR法从单侧输尿管结扎大鼠肾脏中扩增出目的片段,酶切后定向连入PGC-FU载体,将该重组质粒转化到Ecoli感受态细胞中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增;通过PCR及基因测序检测其构建的正确性;PGC-FU-PAX2瞬时转染肾小管上皮细胞模型的建立:脂质体转染法将重组质粒转入肾小管上皮细胞(NRK52E细胞),RT-PCR法、Western blot法分别检测NRK52E细胞PAX2基因、蛋白表达水平,确认...

• 单位
  中国医科大学附属盛京医院; 辽宁医学院附属第一医院