PI3-K/Akt shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

作者：张艳; 高玲娟; 邱文; 任琎; 赵聃; 王迎伟

来源：南京医科大学学报(自然科学版), 2008, 28(04): 407-411.

DOI：10.3969/j.issn.1007-4368.2008.04.001

• PI3-K/Akt
• shRNA
• 肾小球系膜细胞(GMCs)

目的:构建针对PI3-K/Akt基因的特异性短发卡RNA(shRNA)真核表达载体。方法:用DNA重组技术将针对大鼠PI3-K/Akt基因不同位点所设计的8个shRNA序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中。在酶切分析及序列测定后,用脂质体转染至大鼠肾小球系膜细胞(GMCs),Western blot检测蛋白的相对表达量来筛选最佳沉默效率的shRNA。结果:限制性酶切及核酸序列分析证明重组质粒正确。Western blot证实在重组质粒中shPik3c3-2、shAkt1-4具有最佳沉默效率。结论:成功构建了PI3-K/Akt shRNA的真核表达质粒。该实验结果为进一步研究PI3-K/Akt信号通路的生物学功能奠定了基础。

• 单位
  南京医科大学