6种呼吸道病毒RT-RPA检测体系构建与应用

作者：徐聪灵; 王静; 耿合员^*; 张阳; 杨国平; 陈峰; 刘文干^*

来源：病毒学报, 2023, 39(02): 354-363.

DOI：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004241

• 呼吸道病毒
• 逆转录重组酶聚合酶扩增
• 快速检测

早期快速诊断是防控呼吸道病毒传播的有效手段，研发灵敏、特异、快速的分子检测技术方法是早期防控的前提和保障。本研究建立同时快速检测甲型流感病毒（InfluenzaAvirus,FluA）、副流感病毒1型（Human parainfluenza virus 1, HPIV-1）、呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus, RSV）通用型、人偏肺病毒（Human metapneumovirus, HMPV）、人博卡病毒（Human bocavirus, HBoV）通用型和腺病毒B型（Adenovirus type B, AdVB）6种呼吸道病毒重组酶聚合酶扩增（Recombinase polymerase amplification, RPA）检测体系新的技术方法。选择人β-actin基因外显子区域序列作为内标基因，根据6种病毒特异性基因的保守区设计引物探针，结合商业化的逆转录重组酶聚合酶扩增（Revers transcript recombinases polymerase amplification, RT-RPA）反应试剂，优化体系的引物及探针浓度、温度、反应时间，构建6种病毒的RT-RPA检测体系。优化后病毒和内标基因的RT-RPA检测引物和探针终浓度分别为400 nmol/L和200 nmol/L，最佳反应温度为39℃，最优反应时间为15 min。敏感性实验结果表明，本研究建立的RT-RPA反应体系对6种病毒的敏感性为1.0×104拷贝/mL，其中，对AdV-B的敏感性高达1.0×103拷贝/mL；特异性试验结果表明，不同病毒间特异性好，无交叉反应；重复性试验结果表明，6种病毒对高浓度（1.0×107拷贝/mL）和低浓度（1.0×104拷贝/mL）标准品检测出峰时间T变异系数小于5%，重复性好；对100例临床标本进行回顾性实验测试，与市售实时荧光PCR检测试剂盒的阳性符合率、阴性符合率和总体符合率均为100%。本研究提示，建立的RT-RPA检测体系可用于国境口岸对上述6种呼吸道病毒的日常监测与快速检测。

• 单位
  江苏国际旅行卫生保健中心; 安徽安龙基因科技有限公司