基于瞬时表达系统的水稻miRNA靶基因快速验证系统的建立

作者：胡积祥; 曹雅倩; 朱秀梅; 余超; 田芳; 杨凤环; 陈华民^*; 何晨阳

来源：生物技术通报, 2019, 35(10): 57-63.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0175

• 水稻
• miRNA
• 荧光素酶
• 靶基因验证
• 瞬时表达系统

旨在建立一种准确且快速的基于瞬时表达系统的水稻mi RNA靶基因验证系统,为研究水稻miRNAs的生物学功能奠定基础。已有研究证实osa-miR169o剪切靶基因OsNF-YA4(LOCOs03g48970.1)的mRNA,以此为参照,在烟草和水稻原生质体瞬时表达系统中将miR169o前体基因分别与LUC表达载体、LUC-48970和LUC-48970m3融合表达载体瞬时共表达,通过CCD活体成像和Luminometor分析了共表达后LUC活性的动态变化。利用茎环qRT-PCR对miR169o的表达水平进行分析,获得靶基因验证的适合体系。在水稻原生质体体系中,LUC活性和miR169o表达水平在原生质体转化后逐渐增高;24 h时LUC活性最高,相应miR169o表达水平上升10倍左右。综合分析,在原生质体转化后24 h-36 h为适宜检测时间段。在烟草瞬时表达体系中,农杆菌注射72 h后LUC活性最强,而miR169o的表达在48 h后即可上调20倍。因此,农杆菌注射后48 h-72 h为适宜检测时间段。本系统为水稻miRNA靶基因的验证提供了一种简便、快速,且更接近于体内真实情况的实验方法。

• 单位
  植物病虫害生物学国家重点实验室; 中国农业科学院植物保护研究所