沉默PHF8重组慢病毒的制备及其对食管鳞癌细胞增生的影响

作者：孙秀静; 原标; 朱圣韬; 李鹏; 徐有青

来源：首都医科大学学报, 2014, 35(01): 122-128.

• PHD锌指蛋白8
• 慢病毒
• 食管鳞癌细胞
• 细胞增生

目的制备锌指蛋白8(plant homeodomain finger protein 8,PHF8)RNA干扰(RNA interference,RNAi)重组慢病毒(lentivirus)颗粒,建立PHF8表达沉默的人食管鳞癌(esophageal squamous-cell carcinoma,ESCC)稳定细胞系并观察PHF8对细胞增生的影响。方法将目的基因或阴性对照短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)载体与包装载体共转染病毒包装细胞293T,收集并浓缩上清液获得重组慢病毒;测定病毒滴度后用于感染食管鳞癌细胞;通过荧光显微镜及流式细胞仪观察感染效率,嘌呤霉素筛选法建立稳定细胞系;定量PCR及Western Blotting检测PHF8的表达沉默;MTS法检测细胞的增生特性。结果成功制备了沉默PHF8的重组慢病毒;应用重组病毒感染食管鳞癌细胞后,PHF8 mRNA和蛋白的表达水平显著降低,细胞的增生明显下降。结论慢病毒介导的shRNA干扰能有效抑制食管鳞癌细胞的PHF8表达及细胞增生。

• 单位
  首都医科大学附属北京友谊医院; 首都医科大学附属北京天坛医院; 首都医科大学附属北京朝阳医院