大鼠弹力蛋白原基因重组腺病毒载体的构建及在血管平滑肌细胞中的表达

作者：熊江; 殷恒讳; 朱易凡; 叶财盛; 王深明

来源：中华实验外科杂志, 2007, (10): 1189-1191.

DOI：10.3760/j.issn:1001-9030.2007.10.012

• 弹力蛋白原
• 腺病毒载体
• 基因治疗
• 平滑肌细胞

目的构建携载大鼠弹力蛋白原（tropoelastin）基因的重组腺病毒载体,并在体外培养大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）中表达。方法利用基因重组技术将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1以及线性化的重组穿梭质粒pShuttleTropoelastin-GFP进行同源重组,筛选出重组黏粒pAdTropoelas- tin-GFP,经过包装、扩增、纯化后获得重组腺病毒AdTropoelastin-GFP,测定病毒滴度。腺病毒体外感染大鼠主动脉平滑肌细胞,一步法提取细胞总RNA,逆转录后,采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）检测tropoelastin的mRNA。结果得到了携载tropoelastin基因的重组腺病毒,纯化后滴度为5×1011pfu/ml,腺病毒转染VSMC后1、3 d tropoelastin mRNA表达较空病毒明显增高（P<0.01）,并超出空病毒转染组2倍以上。结论成功构建了携带tropoelastin的重组腺病毒载体,体外转染的VSMC有效表达目的基因。

• 单位
  中山大学附属第一医院