siRNA沉默β-Catenin对肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

作者：葛文松; 吴建新; 陈颖伟; 范建高

来源：肝脏, 2011, 16(04): 308-311.

DOI：10.14000/j.cnki.issn.1008-1704.2011.04.022

• 肝星形细胞
• 小分子干扰RNA
• β-Catenin基因
• Ⅰ型胶原
• Ⅲ型胶原

目的研究siRNA干扰β-Catenin表达、阻断Wnt/β-Catenin信号通路对肝星状细胞(HSC)Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法将化学合成siRNAβ-Catenin以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照,抽提细胞总RNA及蛋白质,收集培养上清液,应用反转录-聚合酶链反应和Western blot法检测细胞β-Catenin表达;Western blot法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达情况;细胞免疫荧光法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达与定位;酶联免疫吸附法检测培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量。结果转染siRNA的HSC-T6细胞β-Catenin基因及蛋白表达水平明显下调,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达显著下调,免疫细胞化学提示转染siRNAβ-Catenin后的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达均较对照组明显减弱;48h和72h时培养上清液中Ⅰ型胶原表达水平显著减少,分别比阴性对照下降(23.68±7.96)%和(38.42±6.58)%(F=18.26,P<0.01;F=26.38,P<0.01),Ⅲ型胶原含量于72h时降低(39.68±4.92)%(F=37.68,P<0.01)。结论 siRNAβ-Catenin能高效抑制HSC-T6细胞β-Catenin表达,阻断Wnt/β-Catenin信号通路,从而抑制HSC-T6细胞增殖,显著减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌,具有预防及治疗肝纤维化的潜力。

• 单位
  上海交通大学医学院附属新华医院