SmD1蛋白原核可溶性表达及其IgG抗体检测应用

作者：范见佩; 钟运华; 汤文辉; 杨自华

来源：检验医学与临床, 2014, z2: 26-29.

DOI：10.3969/j.issn.1672-9455.2014.26.011

• SmD1
• 系统性红斑狼疮
• 原核表达

目的获取可溶性SmD1重组蛋白，并建立抗SmD1抗体ELISA检测方法。方法采用 PCR方法扩增SmD1基因，构建表达质粒pET‐21a‐SmD1，转化到大肠杆菌BL21，在16℃条件下，1 mM IPTG诱导表达10 h ，SDS‐PAGE电泳分析表达产物，镍柱亲和层析纯化，Bradford法测定蛋白浓度，建立间接 ELISA法，检测215例常见自身免疫性疾病血清样本。结果通过双酶切和测序结果表明成功构建表达质粒pET‐21a‐SmD1，SDS‐PAGE 电泳得知目的蛋白以可溶性表达为主，经镍柱纯化获得单一目的蛋白，浓度为0．62 mg／mL。46．1％ SLE患者呈抗SmD1抗体阳性，其次是MCTD（20％），其他疾病的检出率均小于15％，SLE组与非SLE组的灵敏度差异有统计学意义（P＜0．05）。抗SmD1抗体对SLE特异性为93％，高于非SLE组，其他疾病组均小于80％。结论可溶性表达的SmD1蛋白具有较好的抗原性，抗SmD1抗体有助于临床辅助诊断SLE。

• 单位
  吴川市人民医院; 广东省深圳市人民医院; 广州中医药大学