大鼠组织激肽释放酶8重组腺病毒载体的构建及鉴定

作者：曹步清; 刘铁牛

来源：国际检验医学杂志, 2013, (18): 2355-2357.

• 组织激肽释放酶8
• 腺病毒载体
• 逆转录聚合酶链反应 Kallikrein 8
• recombinant adenoviral vector
• reverse transcriptase polymerase chain reaction

目的构建大鼠组织激肽释放酶8(KLK8)的腺病毒表达载体,为进一步研究KLK8对心肌细胞的作用提供实验基础。方法采用AdEasy系统构建携带外源性KLK8编码基因的重组腺病毒载体pAd-KLK8,转染AD-293细胞包装产生重组腺病毒Ad-KLK8,TCID50法对收获病毒进行滴度鉴定,RT-PCR及Western-blot方法检测目的基因在Hela细胞的表达。结果 PCR、序列测定以及限制性酶切证实KLK8基因正确插入腺病毒表达载体,并在AD-293细胞中包装出重组腺病毒;收获病毒的滴度为3.16×1012 IU/mL。结论成功构建pAd-KLK8重组腺病毒表达载体,且重组腺病毒在Hela细...

• 单位
  中国人民解放军第三〇三医院