人vasorin蛋白的基因克隆、表达及纯化

作者：丁红梅; 赵强; 王玮; 李慧; 刘农乐; 李洁; 苏雪婷; 黄皑雪; 房涛; 李少华; 邵宁生

来源：生物技术通讯, 2014, 25(01): 38-41.

• 人vasorin蛋白
• 原核表达
• 纯化

目的:克隆、表达人vasorin(VASN)蛋白。方法:利用PCR方法从HepG2细胞的cDNA中扩增获得目的基因,并插入带有6×His标签的原核高效可溶性表达载体pET28a中,构建重组表达质粒pET28a-VASN,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后目的基因获得表达,对融合目的蛋白进行Ni2+金属螯合柱纯化。结果:内切酶鉴定及基因序列测定证实重组表达质粒构建成功;对目的蛋白进行了原核表达,SDS-PAGE显示相对分子质量为61×103的特异表达条带;Western印迹证实目的蛋白为VASN,且主要以包涵体形式存在;对经尿素变性的表达产物进行了亲和层析纯化,有利于以后的变性、复性过程。结论:获得了人VASN融合蛋白,为其进一步的生物学功能研究奠定了基础。

• 单位
  军事医学科学院基础医学研究所; 武警后勤学院