耐盐性谷氨酰胺酶在Bacillus subtilis 168中的整合表达

作者：徐朝阳; 张显; 徐美娟; 杨套伟; 饶志明^*

来源：食品与生物技术学报, 2020, 39(06): 22-29.

• 谷氨酰胺酶
• Bacillus subtilis 168
• 整合表达
• 蛋白酶
• 遗传稳定性

微生物质粒过表达外源基因,会由于质粒分离稳定性低、种子培养基中需添加抗生素等原因,限制其在工业生产中的应用。为了得到一株可用于工业生产谷氨酰胺酶的菌株,选择食品安全级Bacillus subtilis 168作为宿主,将来源于Micrococcus luteus K-3的编码耐高浓度盐的谷氨酰胺酶基因(Mglu)插入到其染色体上进行整合表达。选择了2个内源性蛋白酶基因作为整合表达位点,通过lox序列的重组消除抗性基因,得到无抗性基因的重组谷氨酰胺酶表达菌株。遗传稳定性研究表明,在不添加抗生素的条件下,通过连续传代重组菌株并测定发酵酶活,发现重组菌株连续传42代时,酶活基本不变。随后,采用5 L发酵罐对重组菌株进行分批补料发酵,最高酶活达到了41.5 U/mL。本研究对提高谷氨酰胺酶重组菌株遗传稳定性提供了借鉴。

• 单位
  生物工程学院; 江南大学; 工业生物技术教育部重点实验室