炭疽芽孢杆菌PA-LF1融合蛋白的原核表达及其反应原性研究

作者：吕双飞; 马勋^*; 王静^*; 孔翠莲; 寇丽君; 刘彩霞; 史唯地; 康立超; 任慧杰

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(02): 674-683.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.02.025

• 炭疽芽孢杆菌
• PA-LF1基因
• 克隆
• 原核表达

【目的】构建炭疽芽孢杆菌弱毒株C40-202 PA-LF1融合基因表达载体并对其进行原核表达和反应原性检测，为炭疽亚单位疫苗制备、炭疽诊断和疫苗免疫效果检测提供依据。【方法】根据GenBank中登录的炭疽芽孢杆菌PA和LF基因序列设计2对引物，利用PCR方法从炭疽芽孢杆菌弱毒株C40-202中分别扩增出PA和LF1基因片段，经XhoⅠ限制性内切酶消化后，通过黏性末端进行连接，获得PA-LF1融合基因片段，利用SWISS-MODEL分析软件分别对PA、LF1和PA-LF1融合蛋白进行三级结构预测；将融合基因片段克隆至pET32a(+)质粒中，构建重组质粒pET32a-PA-LF1,并将重组质粒pET32a-PA-LF1转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达，SDS-PAGE分析重组蛋白表达，Western blotting鉴定融合蛋白并分析其反应原性。【结果】从炭疽芽孢杆菌弱毒C40-202株成功扩增出PA、LF1和PA-LF1融合基因；成功构建了炭疽芽孢杆菌PA-LF1融合基因表达质粒pET32a-PA-LF1,融合蛋白三级结构预测可折叠为正确的空间构象；构建的重组质粒经诱导表达、纯化和SDS-PAGE,获得分子质量为96 ku的融合蛋白，以包涵体形式表达；经Western blotting验证，纯化后的重组蛋白与经Ⅱ号炭疽芽孢苗免疫后的绵羊血清发生特异性结合，表明其具有良好的反应原性。【结论】PA-LF1融合蛋白具有良好的反应原性，可为炭疽诊断和疫苗免疫效果检测提供理论依据，同时也可作为一种炭疽亚单位疫苗的候选组分。

• 单位
  动物科技学院; 石河子大学; 新疆农垦科学院