VEGF和Smad7双基因过表达慢病毒载体的构建

作者：李志然; 马强; 马利民^*

来源：交通医学, 2019, 33(02): 107-110.

DOI：10.19767/j.cnki.32-1412.2019.02.001

• 血管内皮生长因子
• Smad7
• 慢病毒载体
• 勃起功能障碍

目的:构建过表达VEGF和Smad7双基因的慢病毒载体,为勃起功能障碍基因治疗的研究提供有效工具。方法:根据GenBank中基因信息,设计合成VEGF和Smad7引物,采用overlap PCR方法扩增目的基因片段,运用基因重组技术将其克隆至慢病毒表达载体Ubi-MCS-3FLAG-CBh-gcGFP-IRES-puromycin,经酶切、测序对重组质粒进行验证。将重组质粒和Helper1.0、pHelper2.0辅助质粒共转染293T细胞,包装双基因过表达慢病毒并测试其滴度。结果:经酶切和测序鉴定表明VEGF和Smad7双基因重组慢病毒载体构建成功,荧光法测定重组慢病毒滴度高(2E+8TU/mL)。VEGF和Smad7重组慢病毒能高效转染293T细胞,Western blot检测显示VEGF和Smad7蛋白在靶细胞中过表达。结论:成功构建了携带VEGF和Smad7基因并能正确表达的高滴度的重组慢病毒载体。

• 单位
  南通大学附属医院