P27~(Kip1)和TGF-β1在原代APL细胞凋亡中作用机制的研究

作者：王蕾; 李艳; 王萍萍; 卢香兰; 王柏勋

来源：中国实验血液学杂志, 2009, 17(02): 324-330.

• P27Kip1
• TGF-β1
• 急性早幼粒细胞白血病
• 细胞凋亡
• Cyclin E
• 三氧化二砷

本研究探讨三氧化二砷(arsenictrioxide,As2O3)对原代APL细胞凋亡及周期的影响,As2O2作用前后P27Kip1、TGF-β1、cyclinE和bcl-2的变化以及P27Kip1在As2O3诱导急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡中的作用。用细胞形态学及流式细胞仪分别检测原代APL细胞凋亡和细胞周期改变,免疫组织化学法和RT-PCR技术检测药物处理前后细胞P27Kip1、TGF-β1、cyclinE以及BCL-2蛋白和基因表达的变化。结果表明:As2O3与APL细胞共同培养24小时,浓度为1、5、10μmol/L时,凋亡细胞所占比例分别为1.42%、4.57%、10.67%;至48小时,凋亡细胞分别为8.92%、16.07%和18.90%,明显高于相同浓度的As2O3作用24小时(p<0.05);至72小时,细胞以碎片为主。同一时段随着As2O3浓度的增加,APL细胞凋亡不断增多;同一浓度As2O3作用于APL细胞,随着作用时间的延长,APL细胞凋亡也随之增多。5、10μmol/L的As2O3作用于APL细胞24、48、72小时可见细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例均明显高于对照组(p<0.05),而1μmol/LAs2O3作用后的细胞周期无明显变化。1、5和10μmol/LAs2O3作用于APL细胞,P27Kip1蛋白表达增高,P27Kip1mRNA与β-actin灰度值之比(P27Kip1/β-actin)分别为0.181、0.489和0.921,表明随着As2O3浓度的增高,P27Kip1mRNA表达水平显著上调(p<0.05),P27Kip1表达与凋亡细胞数之间存在正相关(r=0.55,p<0.05);与对照组相比,TGF-β1蛋白和mRNA表达上调,伴有CyclinE、BCL-2蛋白和mRNA表达下调,TGF-β1表达与凋亡细胞数之间存在正相关(r=0.51,p<0.05),TGF-β1表达与P27Kip1表达之间也存在正相关(r=0.31,p<0.05)。结论:As2O3体外可诱导原代APL细胞凋亡,存在时间-剂量依赖关系,并使细胞周期阻滞于G1期。P27Kip1表达的变化情况与As2O3诱导细胞凋亡的作用效果密切相关,As2O3诱导原代APL细胞凋亡的机制可能是通过上调TGF-β1,从而上调P27Kip1,拮抗CyclinE和BCL-2的作用,抑制细胞增殖,使细胞周期阻滞于G1期,从而诱导细胞发生凋亡。

• 单位
  中国医科大学