三重PCR检测黄瓜炭疽病菌、菌核病菌和细菌性萎蔫病菌

作者：王楠; 王伟

来源：植物病理学报, 2014, 44(02): 129-138.

DOI：10.13926/j.cnki.apps.2014.02.006

• 黄瓜炭疽病菌
• 黄瓜菌核病菌
• 黄瓜细菌性萎蔫病菌
• 分子检测
• 三重PCR

本试验建立一种可同时检测黄瓜炭疽病(Colletotrichum orbiculare)、黄瓜菌核病(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)和黄瓜细菌性萎蔫病(Erwinia tracheiphila)等黄瓜主要病害病原菌的三重PCR检测体系。采用正交试验设计方法,对三重PCR的影响因素分析研究,进行退火温度优化,并以3个引物组、Taq DNA聚合酶、dNTP和Mg2+共6因素3水平进行多重PCR体系优化,成功建立了适合黄瓜主要病害的三重PCR最佳检测体系,即25μL的反应体系中含有0.24μmol·L-1CY1/CY2;0.72μmol·L-1SSFWD/SSREV;0.336μmol·L-1ET-P1/ET-P2;1 U Taq聚合酶;0.15 mmol·L-1dNTP;1 mmol·L-1MgCl2,最适退火温度为63℃。该方法能够快速从田间黄瓜发病植株和根围土壤中将黄瓜炭疽病菌、黄瓜菌核病菌和黄瓜细菌性萎蔫病菌检测出来,灵敏度可以达到10 pg·μL-1。

• 单位
  生物反应器工程国家重点实验室; 食品与生物工程学院; 郑州轻工业学院; 华东理工大学