牛环形泰勒虫enolase基因的原核表达及生物信息学分析

作者：郑会珍; 普浩; 缪荣浩; 甘露; 葛晓敏; 巴音查汗; 李永畅^*; 郭庆勇^*

来源：中国畜牧兽医, 2022, 49(10): 3972-3981.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.10.030

• 牛环形泰勒虫
• enolase基因
• 重组蛋白
• 生物学特性

【目的】获得牛环形泰勒虫(Theileria annulata)新疆株enolase基因，并分析其生物学特性及反应原性。【方法】对牛环形泰勒虫enolase基因进行扩增和克隆，构建原核表达载体pGEX-4T-1-enolase,诱导表达enolase重组蛋白并进行蛋白纯化，通过Western blotting验证enolase重组蛋白反应原性。利用生物信息学方法对enolase基因编码蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区、信号肽、磷酸化、亚细胞定位及蛋白互作网络进行预测分析。【结果】PCR扩增出大小为1 248 bp的牛环形泰勒虫enolase基因片段，enolase重组蛋白大小约70 ku; Western blotting结果表明，该重组蛋白与牛环形泰勒虫阳性血清发生反应。enolase基因编码416个氨基酸，理论等电点为5.91,有38个磷酸化位点；二级结构主要由α-螺旋(43.03%)和无规则卷曲(33.17%)组成；具有17个B细胞抗原表位，亚细胞定位主要位于细胞质中；enolase蛋白与磷酸甘油酸变位酶(PGAM)、二磷酸核苷激酶(NDK)、磷酸甘油酸激酶(PGK)、热休克蛋白70(HSP70)存在相互作用。【结论】本试验成功克隆出新疆牛环形泰勒虫enolase基因，蛋白互作网络预测其与糖酵解和能量代谢相关的蛋白相互作用。研究结果为牛环形泰勒虫能量代谢途径基因的相关研究奠定基础。

• 单位
  新疆农业大学