真核表达载体pEGFP-GPC3的构建及表达

作者：刘春辉; 张志明; 刘剑勇

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2012, (05): 462-465.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.006407

• GPC3
• EGFP
• 真核表达
• 树突状细胞 GPC3
• EGFP
• eukaryotic expression
• dendritic cells

目的:构建磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)真核表达载体pEGFP-GPC3,并在小鼠树突状细胞(DC)表达。方法:将质粒pCMV-SPORT6-GPC3和载体pEGFP-N1分别进行双酶切获得目的基因GPC3片段和空载体,回收纯化后用T4连接酶将两者连接并转化E.coli DH5α菌株,用EcoR I、BamH I双酶切鉴定后通过脂质体法转染到DC中,然后进行荧光检测和Western blot分析。结果:构建的真核表达载体pEGFP-GPC3,转染DC后,荧光显微镜下可见转染的DC中有EGFP-GPC3融合蛋白的表达,Western blot分析发现有相对分子质量(Mr)大小约为67 000的...

• 单位
  广西医科大学附属肿瘤医院