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摘要
目的探讨miR-135a-5p增强舌鳞状细胞癌细胞对奥沙利铂(oxaliplatin, L-OHP)敏感性的作用及其可能机制。方法采用实时荧光定量PCR法检测人口腔角质形成细胞(human oral keratinocyte, HOK)和舌鳞状细胞癌细胞系CAL-27、SCC9、SCC25细胞中miR-135a-5p和B淋巴瘤莫洛尼鼠白血病病毒插入区1(B-lymphoma Moloney murine leukemia virus insertion region-1, BMI1)mRNA相对表达量,采用Western blot法检测4种细胞BMI1蛋白相对表达量。对数生长期SCC25细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-135a-5p模拟物组(miR-135a-5p模拟物)和空白对照组(不进行转染操作),采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞miR-135a-5p和BMI1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测3组细胞BMI1蛋白相对表达量,采用荧光素酶报告实验检测miR-135a-5p与BMI1的靶向关系。SCC25细胞加入不同浓度L-OHP,采用CCK-8实验检测L-OHP对细胞的半数抑制浓度,确定L-OHP在后续实验中的浓度。对数生长期SCC25细胞再分为miR-NC+pcDNA-NC组(转染miR-NC和pcDNA-NC)、miR-135a-5p模拟物+pcDNA-NC组(转染miR-135a-5p模拟物和pcDNA-NC)、miR-135a-5p模拟物+pcDNA-BMI1组(转染miR-135a-5p模拟物和pcDNA-BMI1)、对照组(不进行转染操作),采用实时荧光定量PCR法检测细胞miR-135a-5p和BMI1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞BMI1蛋白相对表达量,采用EdU增殖实验检测细胞增殖情况,采用Transwell实验检测迁移细胞数和侵袭细胞数,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 CAL-27、SCC9、SCC25细胞miR-135a-5p相对表达量(0.43±0.04、0.62±0.09、0.41±0.07)均低于HOK细胞(1.00±0.15)(P<0.05),BMI1 mRNA(4.57±0.67、2.64±0.59、5.82±0.87)和蛋白(0.61±0.22、0.34±0.28、1.00±0.24)相对表达量均高于HOK细胞(1.00±0.31、0.21±0.14)(P<0.05);与HOK细胞比较,SCC25细胞miR-135a-5p、BMI1 mRNA和蛋白相对表达量差异最大,选用SCC25细胞进行后续实验。miR-135a-5p模拟物组细胞miR-135a-5p相对表达量高于miR-NC组、空白对照组(P<0.05),BMI1 mRNA和蛋白相对表达量均低于miR-NC组、空白对照组(P<0.05);miR-NC组细胞miR-135a-5p、BMI1 mRNA和蛋白相对表达量与空白对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-135a-5p靶向BMI1。miR-135a-5p模拟物+pcDNA-BMI1组、miR-135a-5p模拟物+pcDNA-NC组miR-135a-5p相对表达量均高于对照组、miR-NC+pcDNA-NC组(P<0.05),miR-135a-5p模拟物+pcDNA-BMI1组与miR-135a-5p模拟物+pcDNA-NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-135a-5p模拟物+pcDNA-BMI1组、miR-135a-5p模拟物+pcDNA-NC组BMI1 mRNA和蛋白相对表达量、L-OHP对细胞的半数抑制浓度、EdU阳性细胞数、迁移细胞数、侵袭细胞数均低于对照组、miR-NC+pcDNA-NC组(P<0.05),miR-135a-5p模拟物+pcDNA-BMI1组均高于miR-135a-5p模拟物+pcDNA-NC组(P<0.05)。miR-135a-5p模拟物+pcDNA-BMI1组、miR-135a-5p模拟物+pcDNA-NC组细胞凋亡率高于miR-NC+pcDNA-NC组、对照组(P<0.05),miR-135a-5p模拟物+pcDNA-BMI1组低于miR-135a-5p模拟物+pcDNA-NC组(P<0.05);以上指标miR-NC+pcDNA-NC组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论miR-135a-5p通过靶向抑制BMI1表达,增强舌鳞状细胞癌细胞对L-OHP的敏感性。
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