全人源抗狂犬病病毒G蛋白单链抗体制备及中和活性鉴定

作者：张倩倩; 赵茜; 张晓; 丁贵鹏; 金秋; 高畅; 熊四平; 陈玉平; 朱进; 冯振卿

来源：南京医科大学学报(自然科学版), 2013, 33(07): 927-931.

• 狂犬病病毒G蛋白
• 噬菌体抗体库
• 单链抗体(scFv)
• 中和活性

目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性。方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库。以纯化的狂犬病病毒G蛋白包板筛选,对阳性克隆进行可溶性表达,并鉴定中和活性。结果:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,库容为5.0×107,经核酸序列分析,证实插入片段为scFv。经过5轮筛选,从富集的次级抗体库中随机挑出140个克隆,通过phage-ELISA鉴定得到4株核酸序列不同的scFv抗体。经His-Trap纯化后进行中和活性鉴定,获得1株有中和活性的scFv,其中和效价为0.13 IU/mg。结论:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,获得1株具有中和活性的抗狂犬病病毒G蛋白scFv抗体,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础。

• 单位
  中国人民解放军南京军区军事医学研究所; 杭州市红十字会医院; 南京医科大学; 江阴力博医药生物技术有限公司