转录因子FOXK1在肾脏缺血再灌注后纤维化中的作用及其机制探讨

作者：徐冰清; 王惠明^*

来源：微循环学杂志, 2023, 33(02): 24-32.

• FOXK1
• 缺血再灌注
• 肾间质纤维化
• Rho/ROCK通路

目的:探讨转录因子FOXK1在肾脏缺血再灌注(I/R)诱导肾间质纤维化中的作用及其机制。方法:包括动物实验和细胞实验。(1)动物实验采用C57BL/6小鼠，随机分为四组：FOXK1+/+假手术组(FOXK1+/+sham组)、FOXK1-/-假手术组(FOXK1-/-sham组)、FOXK1+/++I/R组、FOXK1-/-+I/R组。肾动脉钳制法建立I/R模型；HE、Masson染色观察各组肾组织病理变化，免疫组化法和Western印记法分别检测肾上皮细胞标志物闭锁小带蛋白(ZO-1)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)和Rho/ROCK信号通路蛋白RhoA、ROCK1、p-Cofilin的表达。(2)细胞实验采用人肾小管上皮细胞(HK-2),用慢病毒转染，分别设置对照shRNA组(Ctrl shRNA组)、FOXK-1 shRNA组、Ctrl shRNA+转化生长因子-β1组(Ctrl shRNA+TGF-β1组)和FOXK-1 shRNA+TGF-β1组，用10ng/ml TGF-β1刺激48h。Western印记法检测ZO-1、E-cadherin、α-SMA、Vimentin、RhoA、ROCK1、p-Cofilin及ROCK1作用底物p-LIMK的表达；划痕实验观察各组HK-2细胞迁移能力。结果:与两sham组比较，FOXK1+/++I/R组肾小管间质损伤明显，胶原纤维沉积伴大量炎性细胞浸润，上皮ZO-1、E-cadherin表达下调，α-SMA、Vimentin、RhoA、ROCK1、p-Confilin表达增加(均P<0.05);与FOXK1+/++I/R组相比，FOXK1-/-+I/R组肾小管间质损伤减轻，胶原纤维沉积减少，ZO-1、E-cadherin表达增加，α-SMA、Vimentin、RhoA、ROCK1、p-Cofilin表达降低(均P<0.05)。细胞实验结果显示，与Ctrl shRNA组和FOXK1 shRNA组比较，Ctrl shRNA+TGF-β1组HK-2细胞α-SMA、Vimentin、RhoA、ROCK1、p-LIMK蛋白表达增加(均P<0.05),细胞迁移速度增加；FOXK1 shRNA+TGF-β1组较Ctrl shRNA+TGF-β1组上述纤维化相关蛋白和Rho/ROCK信号通路蛋白表达明显降低(均P<0.05),细胞迁移明显减少。结论:转录因子FOXK1通过激活Rho/ROCK信号通路在肾脏I/R引起的肾间质纤维化过程中起重要调节作用，抑制FOXK1激活可能是防治肾脏纤维化进展的新策略。

• 单位
  武汉大学人民医院