转录因子EB在衰老心肌细胞自噬中的作用机制研究

作者：盛思琪; 谢琳; 姜怡邓; 熊建团; 杨安宁; 吴凯; 杨勇; 杨晓明^*

来源：天津医药, 2023, 51(03): 246-252.

• 肌细胞,心脏
• 细胞衰老
• 转录因子EB
• 细胞自噬
• DNA甲基化
• DNMT3b

目的 探讨转录因子EB(TFEB)在衰老心肌细胞自噬中的作用机制。方法 动物实验：将20只老年Wistar大鼠采取随机数字表法分为假手术组（Sham组）和缺血再灌注组（I/R组）。细胞实验：（1）体外培养大鼠心肌细胞，采用8 g/L D-半乳糖孵育8 d后分为常氧（Normoxia）组和缺氧/复氧（H/R）组。（2）在衰老心肌细胞中分别转染过表达和干扰TFEB腺病毒分为过表达对照（Ad-GFP）组、过表达对照+缺氧/复氧（Ad-GFP+H/R）组、过表达TFEB(AdTFEB)组、过表达TFEB+缺氧/复氧（Ad-TFEB+H/R）组、干扰对照（sh-NC）组、干扰对照+缺氧/复氧（sh-NC+H/R）组、干扰TFEB(sh-TFEB)组、干扰TFEB+缺氧/复氧（sh-TFEB+H/R）组。（3）分别用DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的特异性抑制剂DC-05、TFD、NA处理缺氧/复氧后的衰老心肌细胞分为H/R组、DC-05组、TFD组、NA组。（4）在衰老心肌细胞中转染干扰DNMT3b腺病毒分为干扰对照（sh-NC）组、干扰对照缺氧/复氧（sh-NC+H/R）组、干扰DNMT3b(shDNMT3b)组、干扰DNMT3b缺氧/复氧（sh-DNMT3b+H/R）组。实时荧光定量PCR(qPCR)检测TFEB的mRNA表达水平；Western blot检测衰老心肌细胞中自噬相关蛋白TFEB、LC3B和p62的蛋白表达；巢式甲基化特异性PCR(nMSPCR)检测TFEB启动子区的DNA甲基化水平。结果 与Sham组或Normoxia组比较，I/R组和H/R组中TFEB的mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.01）；过表达TFEB后，与Ad-GFP组比较，Ad-TFEB组LC3B-Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平降低，p62的蛋白表达水平升高（P<0.01），而干扰TFEB后得到相反的结果（P<0.01）。与Sham组或Normoxia组比较，I/R组和H/R组中TFEB启动子区DNA甲基化水平升高（P<0.05）。与H/R组比较，NA组TFEB mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.01）；干扰DNMT3b后，与sh-NC组比较，sh-DNMT3b组TFEB mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.01）。结论 DNMT3b通过调控TFEB启动子区DNA甲基化抑制TFEB的表达，进而促进衰老心肌细胞自噬。

• 单位
  基础医学院; 宁夏回族自治区人民医院; 宁夏医科大学