摘要
目的探讨miRNA-1-3p(miR-1-3p)对骨肉瘤细胞肌细胞增强因子2A(MEF2A)表达及生物学功能的影响。方法收集2019年1月至2020年1月山西省肿瘤医院临床确诊的20例骨肉瘤患者的肿瘤组织及癌旁正常组织,使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测样本中miR-1-3p表达水平。采用qRT-PCR检测骨肉瘤细胞株U2-OS、SAOS-2、MG63、SW1353及人正常成骨细胞株hFOB1.19中miR-1-3p表达水平,选择miR-1-3p表达水平最低的细胞株进行后续实验。构建过表达miR-1-3p载体(miR-1-3p mimcs),转染miR-1-3p mimcs的细胞为miR-1-3p过表达组,转染空载体(miR-1-3p nc)的细胞为对照组;使用CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化。采用miRwalk网站工具预测miR-1-3p靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证;蛋白质印迹法检测各组细胞MEF2A蛋白的表达。结果与癌旁组织相比,骨肉瘤组织中miR-1-3p表达下调(0.31±0.14比0.62±0.21),差异有统计学意义(t=5.31,P<0.01)。miR-1-3p在骨肉瘤U2-OS细胞中表达最低;与对照组相比,miR-1-3p过表达组细胞U2-OS细胞增殖活性受抑制(48 h吸光度值0.56±0.01比0.77±0.03,t=2.77,P<0.01;72 h吸光度值0.87±0.02比1.40±0.03,t=2.93,P<0.01),细胞周期G1至S期阻滞增加[G1期(38.24±0.55)%比(32.11±0.80)%,t=9.27,P=0.01;S期(61.24±0.90)%比(67.78±0.83)%,t=7.52,P=0.02],细胞早期凋亡率升高[(11.20±0.12)%比(1.50±0.12)%,t=2.91,P<0.05]。miRwalk网站工具预测miR-1-3p靶基因为MEF2A。双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-1-3p和MEF2A 3’UTR靶向结合,miR-1-3p过表达组U2-OS细胞荧光素酶活性低于对照组(海肾荧光素酶与萤火虫荧光素酶活性比值0.53±0.06比1.00±0.04,t=4.04,P<0.05);蛋白质印迹法结果显示,miR-1-3p过表达组U2-OS细胞MEF2A蛋白表达水平较对照组低(蛋白相对表达量0.41±0.14比0.77±0.12,t=3.93,P<0.05)。结论 miR-1-3p低表达可能与骨肉瘤细胞增殖、凋亡和周期改变相关。miR-1-3p可负向调控MEF2A蛋白表达并调控骨肉瘤的发生、发展。