猪囊孢球虫和毕氏肠微孢子虫双重巢式PCR检测方法的建立

作者：王朋林; 陈凯丽; 郑玲; 刘林科; 王荣军; 张龙现; 宁长申; 菅复春^*

来源：中国兽医学报, 2021, 41(03): 500-504.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.03.15

• 猪
• 猪囊孢球虫
• 毕氏肠微孢子虫
• 双重nest-PCR

为建立猪囊孢球虫和毕氏肠微孢子虫双重nest-PCR快速检测方法,参考文献引物,合成针对猪囊孢球虫SSU rRNA、毕氏肠微孢子虫ITS位点的特异性序列,优化双重nest-PCR反应中的引物比、退火温度和循环数等各项反应条件,建立快速检测2种肠道原虫的双重nest-PCR方法.针对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检验。结果表明,猪囊孢球虫、毕氏肠微孢子虫最低可检测DNA量分别为209×10-6和527×10-9 mg/L;特异性和重复性良好。用建立的双重nest-PCR方法对48份猪粪样DNA进行检测,用单病原检测nest-PCR扩增猪囊孢球虫和毕氏肠微孢子虫,阳性率分别为12.50%(6/48)和22.92%(11/48),混合感染阳性率为4.17%(2/48);双重nest-PCR猪囊孢球虫和毕氏肠微孢子虫的阳性率分别为8.33%(4/48)和20.83%(10/48),混合感染阳性率为4.17%(2/48);单重nest-PCR和双重nest-PCR检测结果无统计学差异(P>0.05)。表明该方法可用于猪肠道2种原虫流行病学调查和临床检测。

• 单位
  河南农业大学