人肝癌血管内皮生长因子受体3逆转录病毒载体构建

作者：魏春山; 童光东; 王宏艳

来源：医药前沿, 2014, (17): 49-52.

DOI：10.3969/j.issn.2095-1752.2014.17.043

• 血管内皮生长因子受体3
• 逆转录病毒
• 载体
• HepG2细胞

目的构建在人肝癌HepG2细胞内可稳定表达血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)的逆转录病毒载体。方法采用PCR技术扩增VEGFR3片段，克隆至pBABE-puro质粒，构建重组质粒pBABE-puro-VEGFR3，经PCR﹑酶切﹑测序等验证后，体外与PIK包装质粒共同转染293FT细胞，获得携带VEGFR3基因的重组逆转录病毒，感染人肝癌HepG2细胞，获得转入VEGFR3的HepG2细胞，通过QPCR和Western blot进一步验证VEGFR3在HepG2细胞内的表达。结果①获得携带VEGFR3基因的重组质粒pBABE-puro-VEGFR3和人肝癌细胞株HepG2-pBABE-puro-VEGFR3；②QPCR和Western blot分别检测到VEGFR3在靶细胞HepG2-pBABE-puro-VEGFR3中的稳定表达。结论成功构建了携带VEGFR3基因的人肝癌细胞重组逆转录病毒载体。

• 单位
  深圳市中医院; 广州中医药大学; 华中科技大学同济医学院附属同济医院