内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶/真核起始因子2α/转录激活因子6通路与大鼠肝癌细胞增殖及迁移的关系

作者：贺艳平; 李江怀

来源：中华实验外科杂志, 2019, (10).

• 肝癌
• 内质网应激
• 蛋白激酶R样内质网激酶
• 真核起始因子2α
• 转录激活因子6

目的 探讨内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/真核起始因子2α(eIF-2α)/转录激活因子6(ATF6)通路与大鼠肝癌细胞增殖与迁移的关系。方法 采用二乙基亚硝胺(DEN)间断给药法建立大鼠肝癌模型,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肝脏的形态学变化。采用免疫组织化学法检测大鼠肝癌组织中PERK和eIF-2α蛋白的表达；用无水乙醇诱导正常肝细胞(LO2)和高分化肝癌细胞株(CBRH-7919)构建内质网应激细胞模型；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖；采用划痕实验检测细胞的迁移和侵袭能力；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测肝癌组织中PERK、eIF-2a、ATF6、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白的表达,应用SPSS 22.0统计软件分析,肝癌组织相关分析结果采用单因素方差分析和t检验。结果 无水乙醇诱导LO2和CBRH-7919细胞发生内质网应激后,LO2和CBRH-7919细胞细胞迁移能力显著降低,差异有统计学意义(tLO2细胞＝8.910,P<0.01；tCBRH-7919细胞＝30.010,P<0.01)。LO2和CBRH-7919细胞存活率显著降低,差异有统计学意义(tLO2细胞＝11.840,P<0.01；tCBRH-7919细胞＝19.080,P<0.01)。实验组肝癌组织内PERK、eIF-2a、ATF6、Caspase-3蛋白表达显著升高,bcl-2蛋白表达显著降低(tPERK＝8.070,P<0.01；teIF-2a＝11.790,P<0.01；tATF6＝7.750,P<0.01；tbcl-2＝8.670,P<0.01；tCaspase-3＝7.720,P<0.01)。无水乙醇诱导LO2细胞发生内质网应激后,LO2细胞内PERK、eIF-2a、ATF6、bcl-2和Caspase-3蛋白表达量显著升高,bcl-2蛋白表达显著降低(tPERK＝12.910,P<0.01；teIF-2a＝15.810,P<0.01；tATF6＝7.690,P<0.01；tbcl-2＝23.260,P<0.01；tCaspase-3＝22.280,P<0.01)。无水乙醇诱导CBRH-7919细胞发生内质网应激后,CBRH-7919细胞内PERK、eIF-2a、ATF6、bcl-2和Caspase-3蛋白表达显著升高,bcl-2蛋白表达显著降低(tPERK＝9.560,P<0.01；teIF-2a＝12.400,P<0.01；tATF6＝6.880,P<0.01；tbcl-2＝13.840,P<0.01；tCaspase-3＝9.950,P<0.01)。结论 内质网应激PERK/eIF-2a/ATF4通路的激活,明显抑制大鼠肝癌细胞的增殖与迁移。

• 单位
  山西省人民医院; 太原市中心医院