重组腺病毒构建及介导报告基因在豚鼠耳蜗中的表达

作者：刘英鹏; 王国鹏; 沈安民; 王建亭; 陈沛; 李泽文; 龚树生

来源：临床耳鼻咽喉头颈外科杂志, 2007, 21(16): 748-751.

DOI：10.3969/j.issn.1001-1781.2007.16.010

• 腺病毒
• 载体
• 细菌内同源重组
• 基因转移技术
• 耳蜗

目的:带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒,为利用重组腺病毒介导外源基因转导内耳提供依据。方法:通过细菌内同源重组方法构建携带有报告基因的重组腺病毒(Ad-GFP),将重组腺病毒经耳蜗底回途径导入豚鼠耳蜗鼓阶外淋巴后,观察手术后不同时间GFP基因在豚鼠耳蜗内的表达、分布情况;检测手术前后听觉脑干诱发电位,观察手术和病毒对豚鼠听觉功能的影响。结果:构建的重组腺病毒经酶切电泳鉴定正确;豚鼠耳蜗底回途径导入腺病毒24 h后即有报告基因表达,3 d后最高,表达时间可持续2周以上;报告基因表达部位主要分布在血管纹、鼓阶外淋巴面的间皮细胞和耳蜗Corti器等部位;听觉脑干诱发电位(ABR)在各组动物手术前后无明显改变。结论:成功构建了携带GFP基因的重组腺病毒,通过该方法构建的腺病毒可以介导报告基因在豚鼠耳蜗中表达,并且对豚鼠听觉功能无明显影响,为内耳基因治疗提供了理论依据。

• 单位
  首都医科大学; 华中科技大学同济医学院附属协和医院