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摘要
目的 猴痘病毒(MPXV)是一种能引起人畜共患病的正痘病毒属病毒，在人群和野生动物中具有较高的感染率，对人类公共卫生安全造成重大威胁。当前猴痘病毒的相关研究基础较弱，猴痘诊断试剂匮乏。本研究旨在以猴痘病毒基因F3L为对象表达F3L重组蛋白并免疫小鼠，制备F3L多克隆抗体，为猴痘诊断试剂的研发奠定基础。方法 克隆猴痘病毒基因F3L,构建至原核表达载体pET-28a上，测序无误后将重组质粒pET-28a-MPXV-F3L转化E.coli BL21感受态细胞，用优化的IPTG诱导表达条件表达MPXV-F3L重组蛋白，表达蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后采用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定。用纯化的重组蛋白免疫小鼠，制备F3L多克隆抗体血清，采用ELISA检测血清抗体滴度。结果 克隆得到的猴痘病毒F3L基因片段长度为471 bp,表达的pET-28a-MPXV-F3L重组蛋白分子质量约为24.6 ku,其最佳表达条件为IPTG浓度0.2 mmol/L、温度42℃、时间12 h。表达蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后纯度达95.29%,经Western blot鉴定表达蛋白能被相应抗体识别。用该蛋白免疫小鼠，制备获得F3L多克隆抗体ELISA滴度为4.709。结论 重组表达的F3L蛋白具有抗原性，免疫小鼠后能刺激产生高滴度的血清抗体，为F3L蛋白功能分析、猴痘病毒的致病机制研究以及诊断试剂和疫苗的开发奠定了基础。
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