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摘要
旨在在克隆山羊BIRC5基因的基础上，通过过表达或者敲低BIRC5基因表达揭示BIRC5基因对山羊睾丸细胞周期和凋亡的调控作用，为进一步完善BIRC5基因功能奠定基础。本研究以3只3日龄3 kg左右健康简州大耳羊公羊脾脏组织为模板，利用RT-PCR技术克隆山羊BIRC5基因CDS区序列，并进行生物信息学分析。将克隆回收产物连接真核表达载体，从而构建pcDNA3.1(+)-BIRC5。根据山羊BIRC5基因序列设计并筛选有效siRNA。将pcDNA3.1(+)-BIRC5和siRNA分别转染山羊睾丸细胞后，利用Western blot检测BIRC5蛋白表达，利用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡，利用实时荧光定量PCR技术检测对凋亡相关基因Bax、Caspase3、Caspase7、Bcl-2、p53、BCL2L11和PARP1的表达。结果，成功扩增山羊BIRC5基因序列，长度为506 bp,包含5′UTR 28 bp, CDS区429 bp, 3′UTR 49 bp,编码142个氨基酸残基，且与牛亲缘关系最近。过表达BIRC5基因后抑制了细胞凋亡，且细胞被阻滞于G2/M+S期；同时可下调Caspase7、p53、BCL2L11、Bcl-2和Bax基因mRNA的表达，但Caspase3和PARP1 mRNA表达无显著变化。而敲低BIRC5基因表达后可显著促进细胞凋亡的发生，且细胞被阻滞于细胞被阻滞于G0/G1期，而Caspase3、Caspase7和PARP1 mRNA表达显著上升，p53和Bcl-2的表达显著下降，Bax和BCL2L11表达无显著变化。BIRC5基因可抑制山羊睾丸细胞的凋亡，并促进山羊睾丸细胞被阻滞于G2/M+S期。研究结果为进一步深入全面研究BIRC5基因的功能提供重要的试验数据。
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