高雄激素通过诱导细胞焦亡影响卵巢颗粒细胞增殖

作者：项雨; 丁慧敏; 陈田; 徐天月; 葛红山^*

来源：生殖医学杂志, 2023, 32(09): 1399-1406.

• 多囊卵巢综合征
• 高雄激素
• 慢性炎症
• 焦亡

目的 探讨多囊卵巢综合征(PCOS)中高雄激素对卵巢颗粒细胞焦亡、增殖的影响。方法 3周龄的ICR小鼠随机分为对照组(5只)和PCOS组(5只),PCOS组小鼠连续注射脱氢表雄酮(DHEA,6 mg/100 g体重) 21 d,对照组小鼠则注射等体积不含DHEA的芝麻油。通过HE染色观察两组小鼠卵巢形态的变化；运用实时定量PCR和蛋白免疫印迹(WB)观察炎症及焦亡相关基因和蛋白在小鼠卵巢中的表达情况。通过睾酮(10μmol/L)诱导KGN细胞建立高雄诱导的PCOS体外细胞模型，对照组为不添加睾酮的培养基处理的KGN细胞，PCR法检测对照组和睾酮组细胞中炎症(NLRP3、NF-κB、IL-1β)及焦亡(ASC、Caspase-1)相关基因的表达情况，运用WB和免疫荧光技术观察焦亡相关蛋白(Caspase-1、N-GSDMD/GSDMD)的表达情况，CCK8实验和LDH释放实验观察睾酮对KGN细胞生长的影响。结果 HE染色显示PCOS组小鼠卵巢未成熟小卵泡及闭锁卵泡明显增多，提示PCOS模型构建成功。实时定量PCR结果显示，PCOS小鼠卵巢组织中NLRP3、NF-κB、IL-1β、ASC和Caspase-1的mRNA水平显著升高(P<0.05);WB的结果也显示炎症相关蛋白(NLRP3、IL-1β、IL-18)和焦亡相关蛋白(Caspase-1、N-GSDMD/GSDMD)的水平显著高于对照组(P<0.05)。在睾酮诱导的细胞模型中，睾酮组细胞观察到明显的焦亡征象，且炎症及焦亡相关基因表达均显著升高(P<0.05);睾酮处理后焦亡相关蛋白(Caspase-1、N-GSDMD/GSDMD)水平也显著高于对照组(P<0.05)。另外，随着睾酮浓度的增加，KGN细胞存活率逐渐下降；LDH释放实验结果显示，睾酮处理后KGN细胞的活性降低，且在10μmol/L时LDH的释放量最大。结论 高雄诱导的PCOS模型中存在异常的炎症激活和异常的焦亡，这可能是高雄激素影响卵巢颗粒细胞增殖生长的基础，为探讨高雄激素促进PCOS维持和发展的机制提供了新思路。

• 单位
  南京中医药大学; 泰州市人民医院