H2O2对人胚肾293细胞钠钙交换体内向电流的作用及机制

作者：项国剑; 柯永鑫; 陈茜; 王庆峰; 曾琳雯; 李泱; 张建成^*

来源：中华高血压杂志, 2023, 31(11): 1079-1085.

DOI：10.16439/j.issn.1673-7245.2023.11.014

• 钠钙交换体
• 钠钙交换电流
• H2O2
• 全细胞膜片钳技术

目的 探讨H2O2对钠钙交换体(NCX)内向电流的调控及可能的机制。方法 利用绿色荧光蛋白标记表达系统将NCX1.1质粒转染人胚肾293细胞(HEK293),全细胞膜片钳技术记录NCX内向电流，观察H2O2对NCX1.1内向电流和I-V曲线的作用及浓度依赖性作用。选取120个转染阳性的HEK293细胞，随机均分成对照组、H2O2处理组、Gi蛋白抑制剂百日咳毒素(PTX)及H2O2处理组，蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89及H2O2处理组，记录对比处理前后NCX内向电流的变化。Western-blot法检测HEK293组、H2O2组、PTX+H2O2组、H89+H2O2组处理24 h后细胞NCX1.1蛋白水平的变化。结果 H2O2可使NCX1.1内向电流增加，使其电流密度从(-6.22±0.53)pA/pF增加至(-12.92±1.12)pA/pF(n=60,t=2.54,P<0.01),在细胞外灌流不同浓度的H2O2,NCX1.1内向电流增加呈浓度依赖性特征。在倒斜坡刺激模式中，H2O2对内向电流的作用存在电压依赖性。Gi蛋白选择性抑制剂PTX可以逆转H2O2的增加效应[H2O2:(-12.92±1.12)比H2O2+PTX:(-6.76±0.60)pA/pF,t=3.61,n=60,P<0.001]。PKA抑制剂H89同样可以逆转H2O2的增加效应[H2O2:(-12.92±1.12)比H2O2+H89:(-7.22±1.60)pA/pF,n=60,t=4.17,P<0.005]。应用H2O2与HEK293细胞培养24 h后，观察到细胞NCX1.1蛋白表达增加，而PTX及H89可以逆转H2O2对NCX1.1蛋白的增加效应。结论 H2O2刺激可增加NCX1.1内向电流，Gi-环磷酸腺苷(cAMP)-PKA信号通路参与该过程的调节。

• 单位
  福建省立医院; 福建医科大学; 解放军总医院