基于化学交联法固定抗体的新型纸基酶联免疫吸附法的研究

作者：熊诗丹; 刘卓; 文勇; 丁建军^*

来源：微生物学免疫学进展, 2021, 49(06): 38-44.

DOI：10.13309/j.cnki.pmi.2021.06.007

• 纸基酶联免疫吸附测定法
• 聚二甲基硅氧烷
• 氧化修饰
• 化学交联

目的建立高灵敏度的新型纸基酶联免疫吸附测定法(paper-based ELISA, p-ELISA)。方法采用聚二甲基硅氧烷(polydimethylsiloxane, PDMS)印章法制备纸基微孔板,并对纸基微孔表面结构进行表征电镜扫描。用高碘酸钠氧化剂将纸基微孔表面羟基氧化为醛基,与壳聚糖的氨基共价结合形成席夫碱,修饰于纸基微孔表面,随后包被抗体通过EDC/Sulfo-NHS化学交联方式固定于修饰后的纸基微孔表面,建立新型p-ELISA。以检测甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein, AFP)为例,与商业化ELISA进行比较,考察新型p-ELISA的分析性能,确认方法的可行性。结果 PDMS印章法制备纸基微孔板大小均一性好且无渗漏现象。基于化学交联法固定抗体的新型p-ELISA线性范围为0.08～20.00 ng/mL,最低检测限为0.035 ng/mL,测定血清中AFP的回收率为96.30%～104.00%,批内变异系数(coefficient of variation,CV)为7.66%～8.68%,批间CV为7.78%～10.49%。新型p-ELISA与商业化ELISA同时检测不同浓度AFP样本,检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功建立了一种低成本、准确和高灵敏度的新型p-ELISA,可为临床疾病诊断提供简单、有效的检测。

• 单位
  株洲市中医伤科医院