咪康唑抑制肺癌细胞外泌体分泌机制与生物学效应探讨

作者：窦学军^*; 王志远

来源：中华肿瘤防治杂志, 2021, 28(14): 1067-1079.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2021.14.06

• 咪康唑
• 肺癌
• EBP
• 外泌体

目的探讨咪康唑调控肺癌细胞外泌体分泌的机制,及其抑制肿瘤效应。方法以人肺癌细胞A549、H460和人正常肺上皮细胞BEAS-2B为模型,采用电镜观察和外泌体定量试剂盒对外泌体进行定性和定量分析。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测EBP蛋白在不同细胞中的表达以及咪康唑和siRNA的靶向效应;CCK-8法检测A549细胞的增殖活性。结果肺癌细胞A549外泌体数量为120×107 mL-1,H460细胞的外泌体数量为100×107 mL-1,都大于正常肺上皮细胞的外泌体数量(72×107 mL-1),差异有统计学意义(t=13.460,P=0.001;t=19.210,P=0.009)。采用不同浓度咪康唑处理后,能够减少两种肺癌细胞的外泌体分泌数量,并且呈现典型的浓度依赖性,5、10和20μmol/L咪康唑处理后A549细胞分泌的外泌体数量分别为(127.77±7.72)×107 mL-1、(105.38±2.33)×107 mL-1和(72.26±14.48)×107 mL-1,均少于对照组(0μmol/L咪康唑)的(139.79±7.70)×107 mL-1,差异有统计学意义,P值分别为0.049、0.005和<0.001;H460细胞的外泌体数量分别为(95.83±6.31)×107 mL-1、(79.63±8.65)×107 mL-1和(63.91±11.05)×107 mL-1,均少于对照组的(109.29±6.38)×107 mL-1,差异具有统计学意义,P值分别为0.046、0.006和<0.001。咪康唑能够降低肺癌细胞EBP蛋白相对含量,而不影响CYP51和TM7SF2。CCK8细胞增殖实验结果显示,4d后外泌体组的光密度值为1 103.00±137.15,明显高于无外泌体对照组的751.67±32.93(t=4.374,P<0.001),而咪康唑处理后的外泌体组为885.33±61.01,也低于外泌体组,t=2.853,P=0.049。结论咪康唑能够靶向肺癌细胞中的EBP蛋白,通过降低EBP稳定性参与调控肺癌细胞的外泌体分泌和旁分泌作用,抑制肺癌的进展。

• 单位
  航天中心医院