热休克预处理大鼠骨髓间充质干细胞对化疗诱导卵巢颗粒细胞凋亡的抑制作用

作者：汪庆如; 李欣然; 王清; 谢嘉欣; 付霞霏^*

来源：医学研究生学报, 2020, 33(04): 363-369.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2020.04.005

• 热休克
• 骨髓间充质干细胞
• 卵巢颗粒细胞
• 凋亡

目的骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)可促进卵巢血管生成,改善化疗所致的卵巢功能不全,修复卵巢功能,而热休克预处理可降低干细胞的凋亡率,提高干细胞的治疗效果。文章拟研究热休克预处理对MSCs的影响,进一步研究热休克预处理的间充质干细胞对化疗诱导卵巢颗粒细胞凋亡的作用。方法分离、培养及鉴定大鼠骨髓MSCs,采用42℃水浴1 h预处理。向MSCs中加入顺铂(5 mg/L)模拟化疗局部微环境。分为4组:空白对照组、热休克对照组、模型组、热休克模型组。空白对照组为不予其他处理的MSCs,热休克对照组为热休克预处理后的MSCs,模型组为顺铂(5 mg/L)作用后的MSCs,热休克模型组为热休克预处理后再予顺铂(5 mg/L)作用的MSCs。通过CCK-8法、Hoechst33342/PI、流式细胞仪检测法,探究热休克预处理对MSCs的增殖、凋亡及存活率的影响。分离、培养大鼠卵巢颗粒细胞(GCs),建立顺铂(5 mg/L)诱导GCs损伤的体外模型。分为4组:对照组、模型组、MSCs模型组、HS-MSCs模型组。对照组为未经处理的GCs;模型组为经顺铂(5 mg/L)作用后的GCs;MSC模型组、HS-MSCs模型组为GCs加入顺铂(5 mg/L)诱导凋亡后24h分别与MSCs、HS-MSCs以1∶1比例加入Transwell培养板中实现GCs与MSCs的共培养。通过流式细胞仪检测法、Hoechst33342/PI法,探究热休克预处理MSCs是否具有抑制化疗诱导的GCs凋亡的作用。结果在第3、4天热休克对照组MSCs增殖水平显著高于其他3组,MSCs凋亡率低于其他3组;与模型组相比,热休克模型组第3、4天细胞增殖水平显著增加(P<0.05),凋亡率显著下降(P<0.05)。与模型组凋亡率[(53.81±1.89)%)]相比,对照组、MSCs模型组、HS-MSCs模型组[(31.13±2.81)%、(42.76±0.99)%、(36.72±0.96)%]显著下降(P<0.05);与MSCs模型组相比,HS-MSCs模型组凋亡率显著下降(P<0.05)。结论热休克预处理能提高MSCs的增殖水平及存活率,降低其凋亡率,热休克预处理的间充质干细胞可有效抑制化疗诱导的卵巢颗粒细胞凋亡。

• 单位
  南方医科大学珠江医院; 香港大学深圳医院