CASC19调控miR-449b-5p表达对子宫颈癌细胞增殖、凋亡和辐射敏感性的影响

作者：刘艳杰^*; 郭瑞霞; 韩丽萍; 顾浩; 刘明珠

来源：中华妇产科杂志, 2020, 55(01): 36-44.

• 宫颈肿瘤
• RNA, 长链非编码
• 微RNAs
• 细胞增殖
• 细胞凋亡

目的探讨癌易感性候选基因19(CASC19)调控微小RNA-449b-5p(miR-449b-5p)的表达后对子宫颈癌细胞增殖、凋亡和辐射敏感性的影响。方法 (1)培养子宫颈癌细胞系HeLa细胞, 予不同剂量(分别为0、2、4、6、8 Gy)的X线照射, 实时荧光定量PCR技术检测HeLa细胞中CASC19 mRNA和miR-449b-5p的表达水平。(2)不同条件处理后HeLa细胞增殖、凋亡、辐射敏感性及其相关蛋白表达的检测, 其中, 不同处理条件包括沉默CASC19表达、过度表达miR-449b-5p、下调miR-449b-5p并沉默CASC19表达, 相关蛋白包括细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)和组蛋白变异体H2AX(γ-H2AX);采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况, 流式细胞仪检测细胞凋亡情况, 细胞克隆形成实验检测细胞的辐射敏感性(以存活分数表示)。(3)采用双荧光素酶报告基因实验(结果以荧光素酶活性表示)和实时荧光定量PCR技术验证CASC19和miR-449b-5p之间的靶向调控关系。结果 (1)随着X线照射剂量(0、2、4、6、8 Gy)的增加, HeLa细胞中CASC19 mRNA的表达水平逐渐升高(F=502.681, P=0.000), miR-449b-5p的表达水平逐渐降低(F=202.936, P=0.000)。(2)沉默CASC19表达、过度表达miR-449b-5p后, HeLa细胞的存活率显著降低(P<0.05), 凋亡率显著升高(P<0.05), 存活分数显著降低(P<0.05), cyclin D1蛋白的表达水平显著降低(P<0.05), cleaved-caspase-3和γ-H2AX蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);下调miR-449b-5p并沉默CASC19表达后, HeLa细胞的存活率显著升高(P<0.05), 凋亡率显著降低(P<0.05), 存活分数显著升高(P<0.05), cyclin D1、γ-H2AX蛋白的表达水平显著升高(P<0.05), cleaved-caspase-3的表达水平显著降低(P<0.05)。(3)与对照比较, 过度表达miR-449b-5p可显著降低CASC19基因野生型HeLa...

• 单位
  郑州大学第一附属医院