结核分枝杆菌PPE60的GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达和鉴定

作者：熊志红; 朱琰; 李仁德; 庄玉辉; 程小星

来源：实用预防医学, 2012, (05): 647-650.

• 结核分枝杆菌
• PPE60
• GST-融合蛋白
• 表达与鉴定 Mycobacterium tuberculosis
• PPE60
• GST-fusion protein
• Expression and identification

目的构建结核分枝杆菌PPE60的GST融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板,经PCR技术扩增目的基因,将目的基因克隆到pGEX-4T-1载体中,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆。进行质粒的酶切鉴定和序列分析;对重组的大肠杆菌进行诱导表达,SDS-PAGE分析菌体蛋白,凝胶密度扫描分析目的蛋白的表达情况,Western-blot鉴定融合蛋白。结果正确构建了pGEX-PPE60融合表达载体,载体能在大肠杆菌中表达分子量约为70 kDa的重组蛋白,占菌体总蛋白的50%。该融合蛋白能与GST抗体产生阳性反应。结论成功构建了GST-PP...

• 单位
  中国人民解放军第309医院