点突变提高甲酸脱氢酶(CbFDH)的酶活和催化效率

作者：郑俊贤; 王子渊; 杨套伟; 张显; 徐美娟; 饶志明^*

来源：食品与生物技术学报, 2019, 38(03): 1-9.

• 甲酸脱氢酶
• 疏水性
• 定点突变
• 催化效率
• L-正缬氨酸

甲酸脱氢酶(FDH)是工业上常用的辅酶NADH再生酶,而天然的FDH主要缺陷是酶活和催化效率低。作者通过序列比对7种不同来源的FDH,发现其中来源于Candida boidinii的FDH的第93位氨基酸为缬氨酸(V),而其余6种来源均为异亮氨酸(I)。进一步根据疏水性大小,构建4个突变体酶V93L、V93I、V93A和V93G。酶学性质研究表明,除了V93L外,突变体酶的酶活随着第93位氨基酸残基的疏水性增强而提高。其中,V93I的比酶活提高22.6%、催化效率(NAD+)提高了133%。利用V93I偶联L-亮氨酸脱氢酶用于不对称还原2-氧代戊酸合成L-正缬氨酸,结果表明V93I能够提高2-氧代戊酸的转化效率。

• 单位
  江南大学; 生物工程学院