4种家兔呼吸道致病菌多重PCR的建立及初步应用

作者：仇汝龙; 范志宇; 胡波; 宋艳华; 魏后军; 陈萌萌; 朱伟峰; 薛家宾; 王芳^*

来源：中国兽医学报, 2021, 41(10): 1958-1969.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.10.12

• 兔呼吸道疾病
• 多重PCR
• 铜绿假单胞菌
• 肺炎克雷伯氏菌
• 多杀性巴氏杆菌
• 支气管败血波氏杆菌

为建立检测家兔铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)和支气管败血波氏杆菌(Brodetella bronchiseptica)的多重PCR检测方法,参考GenBank数据库中登录的铜绿假单胞菌gyrA基因、肺炎克雷伯氏菌rcsA基因、多杀性巴氏杆菌KMT1基因和支气管败血波氏杆菌flaA基因,设计4对特异性引物,建立能同时扩增4种家兔呼吸道致病菌核酸的多重PCR检测方法,并进一步对其特异性和敏感性进行检测。特异性检测结果显示,该方法能同时扩增出4种家兔呼吸道致病菌的核酸,而对兔出血症病毒、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、产气荚膜梭菌、奇异变形杆菌与肠炎沙门菌无特异性扩增条带,说明该方法特异性良好。敏感性检测结果显示,该方法对铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯氏菌、多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌检测的灵敏度分别为2.5×10-1,2.5×100,2.5×10-2,2.5×10-2μg/L。用建立的多重PCR方法对临床样本进行检测,结果表明,该方法可以快速并且特异地鉴别4种细菌病原的单独或混合感染,与单一PCR检测方法相比无显著性差异(P>0.05)。该方法的建立为家兔呼吸道疾病临床鉴别诊断和4种细菌病原的分离鉴定提供重要的技术手段。

• 单位
  农业部; 江苏省农业科学院