CHO细胞中DNMT3A对ATF3基因甲基化的影响

作者：张梦筱; 王佳贤; 朱建伟; 路慧丽^*

来源：中国医药工业杂志, 2020, 51(09): 1150-1157.

DOI：10.16522/j.cnki.cjph.2020.09.010

• 中国仓鼠卵巢细胞(CHO)
• 转录激活因子3(ATF3)
• CRISPR/Cas9
• DNMT3A

转录激活因子3(ATF3)是一种早期应激反应基因,能够影响细胞增殖、分化、转化和凋亡。中国仓鼠卵巢细胞(CHO)是重组蛋白、单克隆抗体等生物大分子药物生产的主要宿主细胞之一。ATF3能够促进肿瘤细胞的增殖及抗凋亡等作用,理论上可对CHO细胞发挥调节作用。因此本试验对CHO细胞中ATF3的甲基化水平进行深入研究,通过重亚硫酸盐测序法检测CHO-K1细胞中ATF3的甲基化水平,发现ATF3启动子区域的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG)甲基化高达90%。为了进一步研究ATF3甲基化的上游调控机制,构建了敲除DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)的CHO-K1来研究DNMT3A对ATF3甲基化水平的影响。结果表明,敲除DNMT3A后,CHO-K1细胞中的ATF3甲基化水平降低至0,这充分证明了DNMT3A对ATF3的甲基化的调控作用,为CHO细胞的ATF3基因调控研究以及后续CHO细胞株改造提供了理论依据。

• 单位
  上海交通大学