猕猴和人血清IgG/IgM抗体对不同基因修饰猪外周血单核细胞的毒性研究

作者：江建; 李涛^*; 王毅^*

来源：中国临床研究, 2023, 36(01): 7-11.

DOI：10.13429/j.cnki.cjcr.2023.01.002

• 异种移植
• 基因修饰猪
• 猕猴血清
• 人血清
• 抗体
• 外周血单核细胞
• 免疫球蛋白
• 细胞毒性

目的 探讨人/猕猴血清IgG、IgM抗体对不同基因修饰猪外周血单核细胞(PBMC)的细胞毒性，初步筛选适合人/猕猴异种肾移植的猪基因型。方法 构建Gal抗原敲除猪(GTKO),Gal抗原和Sda抗原同时被敲除猪(GTKO/β4GalNT2KO),Gal抗原和Neu5Gc抗原同时被敲除猪(GTKO/CMAHKO),以及Gal、Sda和Neu5Gc三种异种抗原同时被敲除猪(GTKO/β4GalNT2KO/CMAHKO, TKO),并在上述基因修饰猪的三种中分别转入人保护性蛋白hCD55(GTKO/hCD55、GTKO/β4GalNT2KO/hCD55和TKO/hCD55)。分离每种基因修饰猪的PBMC进行体外培养。抽取20只猕猴血清，流式细胞术检测血清IgG/IgM抗体与野生型猪(WT)和各种基因修饰猪PBMC的结合情况，结果用几何平均荧光强度(Gmean)表示；同时利用补体依赖的细胞毒性试验(CDC)检测IgG/IgM对不同基因修饰猪PBMC的杀伤作用；抽取80位健康人血清，重复进行上述检测。结果 (1)猕猴血清IgM与GTKO/β4GalNT2KO/hCD55型猪PBMC的结合(7.70)显著低于其与WT(45.05)、GTKO/hCD55(33.21)、TKO/hCD55(22.52)猪PBMC的抗体结合，CDC结果与之类似(9.83%vs 97.79%, 9.83%vs 42.01%, 9.83%vs 47.57%)。(2)人血清IgG/IgM与GTKO/CMAHKO和TKO/hCD55猪PBMC的结合较低，而对TKO/hCD55猪PBMC的杀伤最低。结论 GTKO/β4GalNT2KO/hCD55猪可能是目前猪-猕猴异种肾移植的最佳供体猪；而对于临床猪-人异种肾移植而言，导入人“保护性”基因hCD55的TKO猪可能是最佳选择。

• 单位
  海南医学院第二附属医院