猪瘟、非洲猪瘟和猪水泡病毒多重荧光RT-PCR同步检测和鉴别诊断方法的建立及应用

作者：史喜菊^*; 刘艳华; 马贵平; 李炎鑫; 刘全国; 赖平安; 高志强; 徐立伟

来源：中国兽医学报, 2021, 41(03): 426-431.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.03.03

• 猪瘟
• 非洲猪瘟
• 猪水泡病
• 多重荧光RT-PCR
• 检测和鉴别

以非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪水泡病毒(SVDV)为研究对象,建立可以同时检测和鉴别诊断这3种病毒混合感染的多重荧光RT-PCR方法,并与单荧光RT-PCR进行比较。经荧光RT-PCR标准曲线分析,建立的所有多重和单重荧光RT-PCR扩增效率E值为90%～110%,R2>0.98,扩增效果良好。敏感性分析结果表明,与单重荧光RT-PCR检测限相比,多重荧光RT-PCR的Ct值略有升高,但结果仍可达到1～10拷贝/μL。特异性分析结果表明,所建立的单重和多重荧光RT-PCR方法特异性均为100%,引物和探针只能扩增出各自的目标病原,无交叉反应。ASFV、CSFV和SVDV单重荧光RT-PCR与多重荧光RT-PCR之间的相关系数分别为0.998 8、0.997 8和0.997 6,与单重荧光RT-PCR相比,建立的多重荧光RT-PCR没有产生明显的干扰和敏感性降低现象。对20份CSFV阳性样品、25份ASFV阳性样品进行验证,100%符合;分别从200份血液和300份肉制品中筛查到ASFV阳性8份和10份,并与单重荧光RT-PCR检测结果相吻合。建立的多重荧光RT-PCR方法可以实现1次取样、1次分析,同时检测和鉴别3种病毒的目的,适用于临床样品混合感染的快速筛选。