基于CRISPR/Cas9技术建立敲除Plac9基因的人胚肾细胞株

作者：薛璐; 欧阳聪; 孙宁远; 秦绪慧

来源：中南民族大学学报(自然科学版), 2019, 38(02): 189-192.

• CRISPR/Cas9
• 基因编辑技术
• 基因敲除
• Plac9

目的:通过CRISPR/Cas9基因编辑技术和流式细胞术相结合,获得可编辑Plac9基因敲除的人胚肾细胞株(293T).方法:根据Plac9外显子设计了4个sgRNAs(S1,S2,S3,S4),分别将其与PX458载体连接,构建了PX458-S1(S2/S3/S4)载体.通过转染试剂lipo2000将表达载体分别转染至293T细胞中,并以流式细胞术对带绿色荧光蛋白标记的细胞进行单细胞分选,分选后的细胞培养一段时间后,用基因组测序和错配酶酶切进行筛选.从筛选好的细胞中提取蛋白,进行Western Blot检测敲除效率.结果:采用CRISPR/Cas9和流式细胞术结合技术成功构建了Plac9蛋白表达缺失的人胚肾细胞株.结论:该方法简便快捷、效率高,可广泛地用于编辑各种细胞和细胞功能研究.

• 单位
  中南民族大学; 生命科学学院