苹果愈伤组织CRISPR/LbCpf1基因编辑体系的建立

作者：刘杨; 张春玲; 肖旭; 由春香; 王小非^*

来源：落叶果树, 2022, 54(06): 10-16.

DOI：10.13855/j.cnki.lygs.2022.06.003

• 苹果
• 愈伤组织
• 基因编辑
• CRISPR/Cpf1

为在苹果愈伤组织中建立CRISPR/Cpf1基因编辑体系，构建双靶点CRISPR/LbCpf1载体，靶向正调控花青苷积累的苹果MdMYB1转录因子基因。转化王林愈伤组织，通过测序以及花青苷积累实验验证敲除效率。结果表明，CRISPR/LbCpf1在苹果愈伤组织中可实现44.4%的总突变率，其中靶点1突变率为22.2%,靶点2为33.3%。CRISPR/LbCpf1易造成2个碱基对(bp)以及7～9 bp的小片段删除，占比68.8%,在距PAM序列远端14～22 bp位置发生突变概率较高，符合典型CRISPR/LbCpf1体系的特点。相对于野生型，成功基因编辑的愈伤组织株系花青苷积累明显减少，综上说明CRISPR/LbCpf1体系可在苹果愈伤组织中实现较高效的基因编辑。

• 单位
  山东农业大学; 作物生物学国家重点实验室